第26期 / 本文由奥来恩团队原创
随着生物技术的迅猛发展，近年来越来越多的生物技术药物获批上市，造福患者。生物技术药物的研发由于其独特性与复杂性，相较于小分子药物而言面临着特殊的挑战。其中，药物出现的未预期的免疫反应对其药代动力学（Pharmacokinetics，PK）、药效动力学（Pharmacodynamics，PD）、安全性（Safety）与有效性（Efficacy）均会产生影响，也是导致药物研发失败的潜在因素之一。本期《奥来恩专家解读》，将着重介绍抗肿瘤生物技术药物的免疫原性评价策略与FDA相关的法规要求。
生物技术药物的免疫原性（Immunogenicity）主要是指其诱发机体对自身或相关蛋白（如治疗性蛋白）的免疫应答或导致免疫相关事件的能力。生物技术药物免疫原性受到多种因素的影响，例如，与受试者相关的自身因素、药物相关因素以及与临床设计相关因素（用药途径与频率、剂量等）。抗肿瘤药物由于抗药物抗体产生而引起的免疫原性可能会中和药物的生物学活性，或与内源性蛋白产生交叉反应，从而导致过敏反应，甚至细胞因子释放综合征（Cytokine Release Syndrome，CRS）等不良事件的发生，进而对药物的有效性和患者的用药安全产生重要影响。对于治疗性蛋白质、多肽及其衍生物、以及含有类似组分的药物（例如，抗体偶联药物）等，其潜在的免疫原性风险是FDA对药物IND和上市申请BLA的安全性与有效性评审的重要内容之一。在IND申请中，虽然基于动物的免疫原性研究由于种属差异，对预测临床试验中人体免疫原性具有局限性，但是仍然有助于非临床研究中药物安全性或有效性数据的解释与整体分析。因此，临床前药物免疫原性研究对评估影响药物临床试验的安全性与有效性的潜在风险与因素，仍具有一定意义。
01．免疫原性研究策略与主要内容
免疫原性检测是抗体药物研发过程中必不可少的一步。根据FDA最新发布的指导原则，药物免疫原性的评估是基于风险评估的整体性研究，通常贯穿生物技术药物研发的整个过程直至上市后。因此，药物免疫原性的研究需要在临床前与临床研究阶段持续开展，是临床前与临床开发的重要组成部分。药物研发公司在向FDA递交IND或BLA时，需要包含关于基于风险评估的药物免疫原性整体性研究计划或报告。药物的免疫原性可以诱发机体产生免疫相关的不良事件，形成抗药物抗体（Anti-Drug Antibody，ADA）和/或中和抗体(Neutralizing Antibody，NAb)。前者主要是检测受试者用药后是否会产生可结合药物的抗体，该抗体的产生可能会引起患者强烈的免疫反应，甚至会危害患者生命安全；而后者则能够进一步确认是否中和药物的生物学活性，从而减弱药物疗效。
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在以ADA检测和表征为主的免疫原性研究，通常应获得抗药物抗体的发生率、滴度、存续时间和中和能力等数据。因此，对相应的方法学进行开发与验证是ADA检测非常重要的基础步骤，药物研发公司应该尽早制定前瞻性的检测策略与计划。在抗肿瘤药物研发早期，FDA对ADA检测的方法学验证要求，通常包括灵敏度（Sensitivity）、特异性（Specificity）、选择性（Selectivity）、精密度（Precision）、临界值（Cut-Point）、药物耐受性（Drug Tolerance）、稳健性（Robustness）、重现性（Reproducibility）以及稳定性（Stability）等。在药物开发过程中，药物研发公司还可以根据研究需要进行检测方法参数的调整，并增加相关的补充验证试验。而对于高风险的创新药，FDA则采用具体情况具体分析（Case-By-Case）原则，可能要求在临床试验前对检测方法进行全面验证（Full Validation）。对免疫原性试验设计，FDA建议采用多层级检测策略与方法，包括筛选（Screening Assay）、确证（Confirmatory Assay）、滴度（Titration Assay）与中和抗体(Neutralization Assay)检测等。在实际检测时，需要充分考虑验证试验的参数设定与影响因素。针对具体研究计划，包括生物样本采样计划与检测计划等，我们建议创新药研发公司与FDA提前进行沟通。尤其是当申请人需要使用替代验证方法的研究计划时，应该提前与FDA进行沟通并获得FDA同意后再开始进行。
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02．免疫原性(ADA)检测与生物样本采集时间
抗肿瘤抗体药物的ADA检测，通常建议结合血液PK和/或PD样本的采集时间点。对于IgG检测，样本采集通常建议在第一次给药暴露后3-6周；而IgA反应可以更早，通常在第一次暴露后的2-3周。对于半衰期长与高风险的药物，ADA检测需要克服高浓度的药物干扰。因此，可以考虑通过提高方法的耐药性（Drug Tolerance），以及选择合理的样本采集时间（例如，尽量晚的样品采集时间来降低药物浓度）来提高样品检测的准确性。此外，对于高风险药物的免疫原性评估，在临床试验中需要考虑ADA形成的动力学进行ADA检测（例如，通过合理的采样计划观察到ADA的产生、增强、维持、以及下降等过程），从而为预测与评估ADA产生的风险提供充分的依据。总之，在临床试验中ADA的评估，应该选择合适的生物样本采集时间点，根据药物免疫原性的风险及作用机制，并结合ADA生成与PD/PK、疗效以及安全性之间的相关性，进行整体性评估与判断，以获取尽可能多的有用信息。
03．免疫原性评价与研究结果报告
对抗肿瘤药物的研发，创新药公司应尽量选择免疫原性潜在风险较小的候选药物，同时对如何减少和控制免疫原性的不良影响进行相应探索研究，并制定应对措施与计划。为了更好地评估药物免疫原性，制定基于风险评估的全程式研究（即从早期药物开发贯穿后期药物研发及上市后的生命周期管理）是一种有效的药物免疫原性风险预测、预测与识别的研究策略。免疫原性研究需要遵循Case-By-Case原则，建议申请人根据待评价的创新药自身情况，提早与FDA进行沟通与交流，制定并采取最适合的样品采集和检测方案。此外，结果分析与研究报告应包括分析方法的开发、选择与验证、合适的采样点、充足的采样体积、样本采集的流程与储存方法以及数据分析选用的统计学方法等。FDA建议在BLA中对药物免疫原性研究提交免疫原性综合总结报告（Integrated Immunogenicity SummaryReport）。该报告主要包括以下内容：免疫原性风险评估（Immunogenicity Risk Assessment）、多层级检测策略（Tiered Strategy）与方法学验证总结、临床试验设计与详细的生物样本采集计划、临床免疫原性数据分析以及结论与风险评估与缓解策略（Risk Evaluation and MitigationStrategy，REMS）。值得注意的是，免疫原性研究应始终关注抗药物抗体（和/或中和抗体）生成对药物PK/PD、有效性及安全性的影响以及与它们之间的相关性。
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信息来源：
[1] FDA Guidance for Industry: Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products. August 2014.
[2] FDA Guidance for Industry: Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products-Developing and Validating Assays for Anti-Drug Antibody Detection. January 2019.
